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                分光光→度计在核酸的定量上也起着重要作用

                作者:佑科仪器 -- 行业领导者

                  分光光度计是指,使单色仪或特殊光源供给的特定波长的单色光◇通过标准试样和被分析试样,比较两者的光强度分析物质成分的分光器。已经成为现代分子生物实验室的常规仪器。
                  核酸的定⌒量是分光光度计使用频率比较高的功能。可以对可溶于缓冲液中的寡核苷酸、单链、双链DNA和RNA进行定量。核酸最高吸收峰的吸收波长∑ 为260nm。由于每个核酸的分子结构不同,因此其换算系数不⊙同。要对不同类型的核酸进行定量,需要预先选择对应的系数。测试后的吸光值经过上述系数的换算,得到了相应的样品浓▂度。测试前,选择正确的步骤,输入原液和稀释液的体积,然后测试空白液和样品液。但是,实验并不顺々利。读数不∴稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的机器,吸光值的漂移☉越大。
                  事实上,分光光度计的设计原理和工作原理允许吸光值在一定范围¤内变化。也就是说,仪器有一定的精度和精度。另外,还需要考虑核酸本身的化学性质和溶解⌒核酸的缓冲液的pH、离子浓度等。测试时离子浓度过高时,读取值有时会漂移,因此推荐使用像TE这样pH值恒定、离子浓度低的缓冲液。
                  样品的稀释浓度也是不可忽视的因素:因为样品中不可避免地存在细小的粒子,特别是核酸样品。这些小粒子的存在会干扰测试效果。为了将粒子→对检查结果的影响控制在最♀小限度,核酸的吸光值优选至少大于0.1A,吸Ψ光值优选为0.1-1.5A。在这个范围内,粒子的干扰比较小,结果稳定。因此,这意味着样品的浓度不能过低或过高(超出光度计的测试范围)。
                  最后是操作「要素。如果混合不充分,吸光值太低,会出现负值。混合液中不能存在气泡。空白液中没有悬浮物。否则,读数漂移会很剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品。不这样做的∞话,浓度差异太大了;换算系数和样品浓度单位的选择一致;窗户磨损的彩杯不能采◆用;样品的体积必须达到彩杯所要求的最小体积等,有很多操作事◥项。
                  除了核酸浓度,分光光度计还同时给出了一些非常重要的比值,代表∑ 了样品的纯度。例如,A260/A280之比因为蛋白的吸收峰为280nm,所以用于评价样品的纯度。纯△样本比大于1.8(DNA)或2.0)RNA)。比值小于1.8或2.0时,表示有蛋白质或酚类的影响。A230表示样品中存在碳水〖化合物、多肽、苯酚等污染物,比较纯净的核酸A260/A230之比大于2.0。检测A320溶液的浊度和其他干扰因素。纯样品,A320一般为0。
                分光光度计
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